Merci fir besicht Nature.com. D'Browser Versioun déi Dir benotzt huet limitéiert CSS Ënnerstëtzung. Fir déi bescht Erfahrung empfeelen mir Iech en aktualiséierte Browser ze benotzen (oder de Kompatibilitéitsmodus am Internet Explorer auszeschalten). An der Tëschenzäit, fir weider Ënnerstëtzung ze garantéieren, wäerte mir de Site ouni Stiler a JavaScript maachen.
Thermophile si Mikroorganismen déi bei héijen Temperaturen opbléien. Si studéieren kann wäertvoll Informatioun ubidden iwwer wéi d'Liewen sech un extrem Bedéngungen adaptéiert. Wéi och ëmmer, et ass schwéier héich Temperaturbedéngungen mat konventionellen opteschen Mikroskopen z'erreechen. Verschidde hausgemaachte Léisunge baséiert op lokaler resistiver elektresch Heizung goufen proposéiert, awer et gëtt keng einfach kommerziell Léisung. An dësem Pabeier stelle mir d'Konzept vun der Mikroskala Laserheizung iwwer d'Mikroskopssiichtfeld vir fir héich Temperaturen fir thermophil Studien ze bidden, während d'Ëmfeld vum Benotzer mëll bleift. Mikroskala Heizung bei moderéierter Laserintensitéit kann mat engem Gold Nanopartikel Beschichtete Substrat als biokompatibel an effizient Liichtabsorber erreecht ginn. Méiglech Effekter vu Mikroskala Flëssegkeetskonvektioun, Zellretentioun an centrifugal thermophoretesch Bewegung ginn diskutéiert. D'Method gouf an zwou Arten bewisen: (i) Geobacillus stearothermophilus, eng aktiv thermophil Bakterie déi sech bei ongeféier 65°C reproduzéiert, déi mir beobachtet hunn ze germinéieren, wuessen a schwammen ënner Mikroskalaheizung; (ii) Thiobacillus sp., eng optimal hyperthermophil Archaea. bei 80°C. Dëst Wierk mécht de Wee fir einfach a sécher Observatioun vun thermophilen Mikroorganismen mat modernen a bezuelbare Mikroskopie-Tools.
Iwwer Milliarde Joer huet d'Liewen op der Äerd evoluéiert fir sech un eng breet Palette vun Ëmweltbedéngungen unzepassen, déi heiansdo aus eiser mënschlecher Perspektiv als extrem ugesi ginn. Besonnesch e puer thermophile Mikroorganismen (Bakterien, Archaea, Pilze) déi Thermophile genannt ginn, fléien am Temperaturberäich vu 45°C bis 122°C1, 2, 3, 4. Thermophile liewen a verschiddenen Ökosystemer, wéi z. oder vulkanesch Beräicher. Hir Fuerschung huet vill Interessi an de leschte Joerzéngte fir op d'mannst zwee Grënn generéiert. Als éischt kënne mir vun hinnen léieren, zum Beispill, wéi d'Thermophile 5, 6, d'Enzyme 7, 8 an d'Membranen 9 bei esou héijen Temperaturen stabil sinn, oder wéi d'Thermophile extremen Stralungsniveauen aushalen10. Zweetens, si sinn d'Basis fir vill wichteg biotechnologesch Uwendungen1,11,12 wéi Brennstoffproduktioun13,14,15,16, chemesch Synthese (Dihydro, Alkoholen, Methan, Aminosäuren, etc.)17, Biomining18 an thermostabile Biokatalysatoren7 ,11, 13. Besonnesch déi aktuell bekannt Polymerase Kettenreaktioun (PCR)19 beinhalt en Enzym (Taq Polymerase) isoléiert vun der thermophiler Bakterie Thermus aquaticus, ee vun den éischten Thermophilen déi entdeckt goufen.
Wéi och ëmmer, d'Studie vun Thermophilen ass keng einfach Aufgab a kann net an engem biologesche Laboratoire improviséiert ginn. Besonnesch lieweg Thermophile kënnen net in vitro mat all Standard Liichtmikroskop observéiert ginn, och mat kommerziell verfügbaren Heizkammeren, normalerweis bewäert fir Temperaturen esou niddereg wéi 40 ° C. Zënter den 1990er hunn nëmmen e puer Fuerschungsgruppen sech der Aféierung vun Héichtemperaturmikroskopie (HTM) Systemer gewidmet. 1994; Gluch et al. D'Heizung / Killkammer gouf konzipéiert baséiert op der Benotzung vun enger Peltier Zelle déi d'Temperatur vu rechteckege Kapillaren kontrolléiert, fir d'Anaerobizitéit 20 ze halen. Den Apparat kann bis zu 100 °C mat enger Rate vun 2 °C/s erhëtzt ginn, wat d'Auteuren erlaabt d'Motilitéit vun der hyperthermophiler Bakterie Thermotoga maritima21 ze studéieren. 1999; Horn et al. E ganz ähnlechen Apparat gouf entwéckelt, nach ëmmer baséiert op der Benotzung vun erhëtzten Kapillaren, déi gëeegent sinn fir kommerziell Mikroskopie fir Zell Divisioun / Verbindung ze studéieren. No enger laanger Period vu relativer Inaktivitéit ass d'Sich no efficace HTMs am Joer 2012 erëm opgaang, besonnesch a Verbindung mat enger Serie vu Pabeiere vun der Wirth-Grupp, déi en Apparat benotzt huet, erfonnt vum Horn et al. Viru fofzéng Joer gouf d'Motilitéit vun enger grousser Zuel vun Archaea, dorënner Hyperthermophilen, bei Temperaturen bis 100°C mat erhëtzten Kapillaren studéiert23,24. Si hunn och den ursprénglechen Mikroskop geännert fir méi séier Erwiermung z'erreechen (e puer Minutten amplaz vun 35 Minutten fir déi festgeluecht Temperatur z'erreechen) an e linear Temperaturgradient vu méi wéi 2 cm iwwer d'Mëttel z'erreechen. Dësen Temperaturgradient-Gestaltungsapparat (TGFD) gouf benotzt fir d'Mobilitéit vu ville Thermophilen bannent Temperaturgradienten op biologesch relevant Distanzen 24, 25 ze studéieren.
Heizung zougemaach Kapillaren ass net deen eenzege Wee fir lieweg Thermophilen ze beobachten. 2012, Kuwabara et al. Hausgemaachte Wegwerf Pyrex Chambers, déi mat Hëtztbeständeg Klebstoff versiegelt sinn (Super X2; Cemedine, Japan) goufen benotzt. D'Probe goufen op enger kommerziell verfügbarer transparenter Heizplack (Micro Heat Plate, Kitazato Corporation, Japan) gesat, déi fäeg ass bis zu 110 ° C z'erhëtzen, awer net ursprénglech fir Bioimaging geduecht. D'Auteuren observéiert efficace Divisioun vun anaerobe thermophilic Bakterien (Thermosipho globiformans, Verdueblung Zäit 24 min) bei 65 ° C. 2020, Pulshen et al. Effikass Heizung vun kommerziell Metal Platen (Attofluor TM, Thermofisher) gouf mat zwee hausgemaachte Heizung Elementer bewisen: engem Deckel an enger Bühn (PCR Maschinn-inspiréiert Konfiguratioun). Dës Associatioun resultéiert zu enger eenheetlecher Flëssegkeetstemperatur a verhënnert Verdampung a Kondensatioun um Enn vum Deckel. D'Benotzung vun engem O-Ring vermeit Gasaustausch mat der Ëmwelt. Dësen HTM, de Sulfoskop genannt, gouf benotzt fir de Sulfolobus acidocaldarius bei 75°C27 ze bilden.
Eng unerkannt Begrenzung vun all dëse Systemer war d'Restriktioun fir d'Benotzung vu Loftziler, all Ueleg-Immersion ass net gëeegent fir sou héich Temperaturen a fir Bildung duerch> 1 mm déck transparent Proben. Eng unerkannt Begrenzung vun all dëse Systemer war d'Restriktioun fir d'Benotzung vu Loftziler, all Ueleg-Immersion ass net gëeegent fir sou héich Temperaturen a fir Bildung duerch> 1 mm déck transparent Proben. Общепризнанным недостатком всех этих систем было ограничение на использование воздушных объектив,к е погружение в масло не подходило fir такой высокой температуры a fir визуализации через прозрачные > 1. En unerkannten Defizit vun all dëse Systemer war d'Begrenzung vun der Notzung vu Loftziler, well all Ueleg-Immersion net gëeegent war fir sou héich Temperaturen a fir Visualiséierung duerch transparente Proben > 1 mm déck.所有这些系统的 一个公认限制是限制使用空气物镜, 任何油浸都不适合这样的高温和通过> 1 毫米厚的透明样品成像. Eng unerkannt Begrenzung vun all dëse Systemer ass d'Begrenzung vum Gebrauch vun engem Loft-entrained Spigel, well all Ueleg-Immersioun net gëeegent ass fir transparent Proben > 1 mm déck bei esou héijen Temperaturen ze bilden. Общепризнанным недостатком всех этих систем является ограниченное использование воздушных обюмектин ружение в масло непригодно fir таких высоких температур an визуализации через прозрачные образцицы мобразци мобразцы мойн. En unerkannten Nodeel vun all dëse Systemer ass d'limitéiert Notzung vu Loftlënsen, all Ueleg-Immersion ass net gëeegent fir sou héich Temperaturen a Visualiséierung duerch transparente Proben > 1 mm déck.Méi viru kuerzem gouf dës Begrenzung vum Charles-Orzag et al. 28, deen en Apparat entwéckelt, deen net méi Hëtzt ronderëm de System vun Interessi gëtt, mä éischter am Cover Glas selwer, Daach mat enger dënn transparent Layer vun engem resistor gemaach vun ITO (Indium-Zinn Oxid). Den Deckel kann bis zu 75 °C erhëtzt ginn andeems en elektresche Stroum duerch déi transparent Schicht passéiert. Den Auteur muss awer och d'Lens zum Objektiv erhëtzen, awer net méi wéi 65 °C, fir se net ze beschiedegen.
Dës Wierker weisen datt d'Entwécklung vun effizienter Héichtemperatur-optescher Mikroskopie net wäit ugeholl gouf, dacks hausgemaachte Ausrüstung erfuerdert an dacks op Käschte vun der raimlecher Opléisung erreecht gëtt, wat e seriöse Nodeel ass, well thermophil Mikroorganismen net méi grouss sinn wéi e puer. micrometers. Reduzéiert Heizvolumen ass de Schlëssel fir dräi inherent Probleemer vun HTM ze léisen: schlecht raimlech Opléisung, héich thermesch Inertie wann de System erhëtzt, a schiedlech Heizung vun Ëmgéigend Elementer (Immersiounsueleg, Objektivlens ... oder Benotzer Hänn) bei extremen Temperaturen. ).
An dësem Pabeier aféieren mir en HTM fir thermophil Observatioun, déi net op resistive Heizung baséiert. Amplaz hu mir lokaliséiert Heizung an enger limitéierter Regioun vum Siichtfeld vum Mikroskop erreecht duerch Laserbestralung vun engem Liichtabsorberende Substrat. D'Temperaturverdeelung gouf visualiséiert mat der quantitativer Phasemikroskopie (QPM). D'Effizienz vun dëser Method gëtt bewisen vu Geobacillus stearothermophilus, eng beweeglech thermophil Bakterie déi sech bei ongeféier 65°C reproduzéiert an eng kuerz Verdueblungszäit huet (ongeféier 20 Minutten), an Sulfolobus shibatae, engem Hyperthermophil deen optimal bei 80°C wächst (Archaea) ze illustréieren. Normal Replikatiounsquote a Schwammen goufen als Funktioun vun der Temperatur observéiert. Dëse Laser HTM (LA-HTM) ass net limitéiert duerch d'Dicke vum Coverslip oder duerch d'Natur vum Objektiv (Loft oder Ueleg Tauche). Dëst erlaabt all héich Opléisung Lens um Maart ze benotzen. Et leid och net vu luesen Heizung wéinst der thermescher Inertie (erreecht Direktheizung op enger Millisekonne Skala) a benotzt nëmme kommerziell verfügbare Komponenten. Déi eenzeg nei Sécherheetsbedéngungen bezéien sech op d'Präsenz vu mächtege Laserstrahlen (typesch bis zu 100 mW) am Apparat a méiglecherweis duerch d'Aen, déi Schutzbrille erfuerderen.
De Prinzip vum LA-HTM ass e Laser ze benotzen fir d'Probe lokal am Gesiichtsfeld vum Mikroskop ze erhëtzen (Fig. 1a). Fir dëst ze maachen, muss d'Probe liicht absorbéierend sinn. Fir eng raisonnabel Laserkraaft (manner wéi 100 mW) ze benotzen, hu mir net op d'Absorptioun vum Liicht duerch de flëssege Medium vertrauen, mee d'Absorptioun vun der Probe kënschtlech erhéicht andeems de Substrat mat Gold Nanopartikelen beschichtet (Fig. 1c). Heizung vun Gold Nanopartikele mat Liicht ass vu fundamentaler Wichtegkeet fir d'Beräich vun der thermescher Plasmonik, mat erwaarten Uwendungen an der Biomedizin, Nanochemie oder Sonneliicht Ernte29,30,31. An de leschte Joren hu mir dësen LA-HTM a verschiddene Studien am Zesummenhang mat thermesche Plasma Uwendungen an der Physik, Chimie a Biologie benotzt. D'Haaptschwieregkeet mat dëser Method ass de finalen Temperaturprofil ze weisen, well déi erhiewt Temperatur limitéiert ass op eng Mikroskala Regioun bannent der Probe. Mir hunn gewisen datt d'Temperaturkartéierung ka mat dem véierwellelängten transversale Schéierinterferometer erreecht ginn, eng einfach, héichopléisend a ganz sensibel Method vu quantitativer Phasemikroskopie baséiert op der Benotzung vun zweedimensionalen Diffraktiounsgitter (och bekannt als Kräizgitter) 33,34,35,36. D'Zouverlässegkeet vun dëser thermescher Mikroskopie Technik, baséiert op duerchgestrachenem Wellenfront Mikroskopie (CGM), ass an enger Dose Pabeieren bewisen iwwer déi lescht Dekade publizéiert ginn37,38,39,40,41,42,43.
Schema vun Installatioun vun parallel Laser Heizung, Formen an Temperatur microscope. b Sample Geometrie besteet aus enger AttofluorTM Chamber mat engem Coverslip mat Gold Nanopartikel Beschichtete. c Kuckt d'Probe gutt (net op Skala). d representéiert den eenheetleche Laserstrahlprofil an (e) déi simuléiert spéider Temperaturverdeelung op der Probefläch vun de Gold Nanopartikelen. f ass en annular Laserstrahlprofil gëeegent fir eng eenheetlech Temperatur ze generéieren wéi an der Simulatioun vun der resultéierender Temperaturverdeelung gewisen (g). Skala Bar: 30 µm.
Besonnesch hu mir viru kuerzem d'Erhëtzung vu Mamendéierenzellen mat LA-HTM a CGM erreecht a verfollegt cellulär Hëtztschockreaktiounen am Beräich vun 37-42 ° C, wat d'Uwendbarkeet vun dëser Technik op eenzel lieweg Zellbildung beweist. Wéi och ëmmer, d'Applikatioun vum LA-HTM fir d'Studie vu Mikroorganismen bei héijen Temperaturen ass net eendeiteg, well et méi Vorsicht erfuerdert am Verglach mat Mamendéierenzellen: éischtens, d'Erhëtzung vum Buedem vum Medium ëm zéng Grad (anstatt e puer Grad) féiert. zu engem staarken vertikalen Temperaturgradient. kann flësseg Konvektioun schafen 44 déi, wann net fest un de Substrat verbonnen, kann ongewollt Bewegung an Vermëschung vun Bakterien Ursaach. Dës Konvektioun kann eliminéiert ginn andeems d'Dicke vun der Flëssegschicht reduzéiert gëtt. Fir dësen Zweck, an all den Experimenter hei ënnendrënner, goufen bakteriell Suspensionen tëscht zwee Coverslips ongeféier 15 µm déck plazéiert an enger Metallbecher (AttofluorTM, Thermofisher, Fig. 1b, c). Prinzipiell kann d'Konvektioun evitéiert ginn, wann d'Décke vun der Flëssegkeet méi kleng ass wéi d'Strahlengréisst vum Heizlaser. Zweetens, d'Aarbecht an esou enger limitéierter Geometrie kann aerobe Organismen erstécken (kuckt Fig. S2). Dëse Problem kann vermeit ginn andeems Dir e Substrat benotzt, deen Sauerstoff permeabel ass (oder all aner vital Gas), andeems d'Loftblasen bannen an de Coverslip gefaange loossen oder duerch Lächer an der ieweschter Ofdeckung ze bueren (kuckt Fig. S1) 45. An dëser Etude, hu mir déi lescht Léisung gewielt (Dorënner 1b an S1). Schlussendlech gëtt Laserheizung keng eenheetlech Temperaturverdeelung. Och bei der selwechter Intensitéit vum Laserstrahl (Fig. 1d) ass d'Temperaturverdeelung net eenheetlech, mee gläicht éischter d'Gaussesch Verdeelung duerch thermesch Diffusioun (Fig. 1e). Wann d'Zil ass, präzis Temperaturen am Siichtfeld ze studéieren fir biologesch Systemer ze studéieren, sinn ongläiche Profiler net ideal a kënnen och zur thermophoretescher Bewegung vu Bakterien féieren, wa se net un de Substrat halen (kuckt Fig. S3, S4)39. Zu dësem Zweck hu mir e raimleche Liichtmodulator (SLM) benotzt fir den Infrarout-Laserstrahl no der Form vum Ring (Fig. 1f) am Fliger vun der Probe ze formen fir eng perfekt eenheetlech Temperaturverdeelung an engem bestëmmte geometresche Gebitt z'erreechen, trotz thermescher Diffusioun (Figebam. 1d) 39, 42, 46. Plaz eng Top Coverslip iwwer e Metalldësch (Figur 1b) fir d'Verdampfung vum Medium ze vermeiden an op d'mannst e puer Deeg ze observéieren. Well dësen Top Coverslip net versiegelt ass, kann zousätzlech Medium einfach zu all Moment bäigefüügt ginn wann néideg.
Fir ze illustréieren wéi LA-HTM funktionnéiert a seng Uwendbarkeet an der thermophiler Fuerschung ze weisen, hu mir d'aerobe Bakterien Geobacillus stearothermophilus studéiert, déi eng optimal Wuesstumstemperatur vu ronn 60-65°C hunn. D'Bakterie huet och Flagella an d'Fäegkeet ze schwammen, e weideren Indikator fir normal cellulär Aktivitéit.
Echantillon (Figebam. 1b) sech bei 60 ° C fir eng Stonn pre-incubated an dann an engem LA-HTM Prouf Titulaire gesat. Dës Pre-Inkubatioun ass fakultativ, awer nach ëmmer nëtzlech, aus zwee Grënn: Éischtens, wann de Laser ageschalt ass, bewierkt et datt d'Zellen direkt wuessen an deelen (kuckt Film M1 an Ergänzungsmaterialien). Ouni Pre-Inkubatioun gëtt de bakterielle Wuesstum typesch ëm ongeféier 40 Minutte verspéit all Kéier wann en neit Gesiichtsgebitt op der Probe erhëtzt gëtt. Zweetens, d'1 Stonn Pre-Inkubatioun gefördert Adhäsioun vun de Bakterien op de Coverslip, verhënnert datt Zellen aus dem Siichtfeld dreiwen wéinst der Thermophorese wann de Laser ageschalt gouf (kuckt Film M2 an Zousazmaterialien). Thermophorese ass d'Bewegung vu Partikelen oder Molekülen laanscht engem Temperaturgradient, normalerweis vu waarm bis kal, a Bakterien si keng Ausnahm43,47. Dësen ongewollten Effekt gëtt iwwer e bestëmmte Beräich eliminéiert andeems Dir SLM benotzt fir de Laserstrahl ze formen an eng flaach Temperaturverdeelung z'erreechen.
Op Fig. Figure 2 weist d'Temperaturverdeelung, déi duerch CGM gemooss gëtt, kritt duerch d'Bestrahlung vun engem Glassubstrat, deen mat Gold Nanopartikele mat engem annularem Laserstrahl beschichtet ass (Fig. 1f). Eng flaach Temperaturverdeelung gouf iwwer dat ganzt Gebitt observéiert, dat vum Laserstrahl bedeckt ass. Dës Zone gouf op 65 ° C gesat, déi optimal Wuesstumstemperatur. Ausserhalb vun dëser Regioun fällt d'Temperaturkurve natierlech op \(1/r\) (wou \(r\) déi radial Koordinat ass).
eng Temperaturkaart vu CGM Miessunge kritt duerch e Benotzung vun engem annularem Laserstrahl fir eng Schicht vu Gold Nanopartikelen ze bestrahlen fir e flaach Temperaturprofil iwwer e kreesfërmeg Gebitt ze kréien. b Isotherm vun der Temperaturkaart (a). D'Kontur vum Laserstrahl gëtt duerch e groe Punktkrees duergestallt. D'Experiment gouf zweemol widderholl (kuckt Zousazmaterialien, Figur S4).
D'Viabilitéit vu bakteriellen Zellen gouf fir e puer Stonnen mat LA-HTM iwwerwaacht. Op Fig. 3 weist den Zäitintervall fir véier Biller aus engem 3 Stonnen 20 Minutte Film (Film M3, Ergänzungsinformatioun). Bakterien goufen beobachtet fir aktiv am kreesfërmege Beräich definéiert vum Laser ze proliferéieren, wou d'Temperatur optimal war, op 65 ° C. Am Géigesaz, war Zell Wuesstem bedeitend reduzéiert wann d'Temperatur ënner 50 ° C fir 10 s gefall.
Optesch Déiftbilder vu G. stearothermophilus Bakterien wuessen no Laserheizung zu verschiddenen Zäiten, (a) t = 0 min, (b) 1 h 10 min, (c) 2 h 20 min, (d) 3 h 20 min, aus 200 Extraitéiert aus engem Film vun enger Minutt (M3 Film zur Verfügung gestallt) op der entspriechender Temperaturkaart iwwerlagert. De Laser schalt zu Zäit \(t=0\) un. Isotherme goufen zum Intensitéitsbild bäigefüügt.
Fir weider Zell Wuesstem a seng Ofhängegkeet op Temperatur ze quantifizéieren, gemooss mir d'Erhéijung vun Biomass vu verschiddene Kolonien vun Ufank isoléiert Bakterien am Film M3 Beräich vun Vue (Figebam. 4). D'Elteren Bakterien um Ufank vun Mini Kolonie administrativ Eenheet (mCFU) Formatioun ausgewielt sinn an Dorënner S6 gewisen. Dréchen Mass Miessunge goufe mat enger CGM 48 Kamera geholl déi benotzt gouf fir d'Temperaturverdeelung ze kartéieren. D'Kapazitéit vum CGM fir dréchent Gewiicht an Temperatur ze moossen ass d'Kraaft vum LA-HTM. Wéi erwaart huet héich Temperatur méi séier Bakterienwachstum verursaacht (Fig. 4a). Wéi an der semi-Log-Plot an der Fig. 4b gewisen, ass de Wuesstum bei all Temperaturen no dem exponentielle Wuesstum, wou d'Donnéeën d'exponentiell Funktioun \(m={m}_{0}{10}^{t/\ tau}+ benotzen {{ \mbox{cst}}}\), wou \(\tau {{{{{\rm{log }}}}}}}2\) – Generatiounszäit (oder Verdueblungszäit), \( g =1/ \tau\) - Wuesstumsquote (Zuel vun Divisiounen pro Unitéit Zäit). Op Fig. 4c weist déi jeeweileg Wuesstumsrate an Generatiounszäit als Funktioun vun der Temperatur. Schnell wuessend mCFUs si charakteriséiert duerch Sättigung vum Wuesstum no zwou Stonnen, e erwaart Verhalen wéinst der héijer bakterieller Dicht (ähnlech wéi déi stationär Phase a klassesch Flëssegkulturen). Déi allgemeng Form \(g\lénks(T\right)\) (Fig. 4c) entsprécht der erwaarter Zwee-Phasekurve fir G. stearothermophilus mat enger optimaler Wuesstumsrate ëm 60-65°C. Match d'Daten mat engem Kardinolmodell (Figure S5)49 wou \(\left({{G}_{0}{;\;T}}_{{\min }};{T}_{{opt}} ;{T}_{{\max}}\right)\) = (0,70 ± 0,2; 40 ± 4; 65 ± 1,6; 67 ± 3) °C, wat gutt mat anere Wäerter stëmmt, déi an der Literatur zitéiert sinn49. Och wann d'Temperaturofhängeg Parameteren reproduzéierbar sinn, kann de maximale Wuesstumsquote vun \({G}_{0}\) vun engem Experiment zum aneren variéieren (kuckt d'Figuren S7-S9 a Film M4). Am Géigesaz zu Temperaturpassende Parameteren, déi universell solle sinn, hänkt de maximale Wuesstumsrate vun den Eegeschafte vum Medium (Disponibilitéit vun Nährstoffer, Sauerstoffkonzentratioun) bannent der observéierter Mikroskala Geometrie of.
a Mikrobielle Wuesstum bei verschiddenen Temperaturen. mCFU: Miniatur Kolonie Formatioun Unitéiten. Daten kritt aus engem Video vun enger eenzeger Bakterie an engem Temperaturgradient wuessen (Film M3). b Selwecht wéi (a), semi-logarithmesch Skala. c Wuesstumsquote\(\tau\) an Generatiounszäit\(g\) berechent aus linearer Regressioun (b). Horizontal Feeler Baren: Temperaturbereich iwwer déi mCFUs während dem Wuesstem an d'Sichtfeld erweidert hunn. Vertikal Feeler Baren: linear Regressioun Standard Feeler.
Nieft dem normale Wuesstum fléien e puer Bakterien heiansdo während der Laserheizung an d'Siicht, wat e erwaart Verhalen fir Bakterien mat Flagella ass. De Film M5 an zousätzlech Informatiounen weist esou Schwammen Aktivitéiten. An dësem Experiment gouf eenheetlech Laserstralung benotzt fir en Temperaturgradient ze kreéieren, wéi an de Figuren 1d, e an S3. Figur 5 weist zwou Bildsequenzen aus dem M5 Film ausgewielt, déi weisen datt eng Bakterie Direktiounsbewegung weist, während all aner Bakterien onbeweeglech bleiwen.
Déi zwee Zäitframe (a) an (b) weisen d'Schwammen vun zwou verschiddene Bakterien mat punktéierte Kreeser markéiert. D'Biller goufen aus dem M5 Film extrahéiert (als Zousazmaterial geliwwert).
Am Fall vum G. stearothermophilus huet d'aktiv Bewegung vu Bakterien (Fig. 5) e puer Sekonnen ugefaang nodeems de Laserstrahl ageschalt gouf. Dës Observatioun betount d'temporär Äntwert vun dësem thermophilesche Mikroorganismus op eng Erhéijung vun der Temperatur, wéi scho vu Mora et al. 24. D'Thema vun der bakterieller Motilitéit a souguer Thermotaxis ka weider mat LA-HTM exploréiert ginn.
Mikrobial Schwammen däerf net mat aner Aarte vu kierperlecher Bewegung verwiesselt ginn, nämlech (i) Brownesch Bewegung, déi als chaotesch Bewegung schéngt ouni definitive Richtung ze sinn, (ii) Konvektioun 50 an Thermophorese 43, besteet aus enger regulärer Bewegung vun der Bewegung laanscht eng Temperatur gradient.
G. stearothermophilus ass bekannt fir seng Fäegkeet héich resistent Spore (Sporebildung) ze produzéieren wann se un negativ Ëmweltbedéngungen als Verteidegung ausgesat sinn. Wann d'Ëmweltbedéngungen erëm gënschteg ginn, keimen d'Spore, bilden lieweg Zellen a fänken de Wuesstum erëm un. Och wann dëse Sporulatiouns- / Keimprozess gutt bekannt ass, ass et ni an Echtzäit observéiert ginn. Benotzt LA-HTM, mir Rapport hei déi éischt Observatioun vun germination Evenementer am G. stearothermophilus.
Op Fig. 6a weist Zäit-Lapse Biller vun opteschen Déift (OT) kritt mat engem CGM Formatioun vun 13 Spore. Fir déi ganz Sammelzäit (15 h 6 min, \(t=0\) - Ufank vun der Laserheizung), 4 vun 13 Spore germinéiert, op successive Zäitpunkten \(t=2\) h, \(3\ ) h \(10 \)', \(9\) h \(40\)' an \(11\) h \(30\)'. Och wann nëmmen ee vun dësen Eventer an der Figur 6 gewise gëtt, kënnen 4 Keimungsevenementer am M6 Film am Ergänzungsmaterial observéiert ginn. Interessanterweis schéngt d'Keimung zoufälleg ze sinn: net all Spore germinéieren a germinéieren net zur selwechter Zäit, trotz der selwechter Verännerung vun den Ëmweltbedéngungen.
engem Time-lapse besteet aus 8 OT Biller (Ueleg immersion, 60x, 1,25 NA Objektiv) an (b) Biomass Evolutioun vun G. stearothermophilus Aggregaten. c (b) Op enger semi-Log-Skala gezeechent fir d'Linearitéit vum Wuesstumsrate ze markéieren (gestreckt Linn).
Op Fig. 6b,c weist d'Biomass vun Zellpopulatiounen am Siichtfeld als Funktioun vun der Zäit iwwer déi ganz Period vun der Datesammlung. De séieren Zerfall vun der dréchener Mass observéiert bei \(t=5\)h an der Fig. 6b, c, wéinst der Sortie vun e puer Zellen aus dem Gesiichtsfeld. De Wuesstem Taux vun dëse véier Evenementer ass \ (0,77 \ pm 0,1 \) h-1. Dëse Wäert ass méi héich wéi de Wuesstem Taux verbonne mat Figur 3. 3 an 4, wou Zellen normalerweis wuessen. De Grond fir de verstäerkte Wuesstumsquote vum G. stearothermophilus vu Spore ass onkloer, awer dës Miessunge markéieren d'Interesse vun LA-HTM a schaffen um eenzegen Zellniveau (oder um eenzegen mCFU Niveau) fir méi iwwer d'Dynamik vum Zellliewen ze léieren .
Fir d'Vielfalt vu LA-HTM a seng Leeschtung bei héijen Temperaturen weider ze demonstréieren, hu mir de Wuesstum vu Sulfolobus shibatae iwwerpréift, eng hyperthermophil acidophil Archaea mat enger optimaler Wuesstemperatur vun 80 ° C51. Am Géigesaz zum G. stearothermophilus hunn dës Archaea och eng ganz aner Morphologie, déi 1 Mikron Kugelen (Cocci) anstatt länglëg Staang (Bacilli) gläicht.
Figur 7a besteet aus sequenziell opteschen Déift Biller vun S. shibatae mCFU kritt benotzt CGM (kuckt M7 Fonktioun Film an Zousaz Material). Dëse mCFU wächst bei ongeféier 73 ° C, ënner der optimaler Temperatur vun 80 ° C, awer am Temperaturbereich fir aktive Wuesstum. Mir hunn multiple Spärungsevenementer observéiert déi mCFUs no e puer Stonnen no Mikrograpes vun Archaea ausgesinn hunn. Vun dësen OT Biller, war mCFU Biomass iwwer Zäit gemooss an an Dorënner 7b presentéiert. Spannen, weisen S. shibatae mCFUs linear Wuesstem anstatt der exponential Wuesstem mat G. stearothermophilus mCFUs gesinn. Et gouf laangfristeg Diskussioun 52 iwwer d'Natur vun Zell Wuesstem Tariffer: während e puer Studien Rapport Wuesstem Tariffer vun microbes datt zu hirer Gréisst proportional sinn (exponential Wuesstem), anerer weisen e konstante Taux (linear oder bilinear Wuesstem). Wéi erkläert vun Tzur et al.53, z'ënnerscheeden tëscht exponentiellen an (bi)lineare Wuesstum erfuerdert eng Präzisioun vu <6% bei Biomassemiessungen, wat fir déi meescht QPM Techniken net erreechbar ass, och mat Interferometrie. Wéi erkläert vun Tzur et al.53, z'ënnerscheeden tëscht exponentiellen an (bi)lineare Wuesstum erfuerdert eng Präzisioun vu <6% bei Biomassemiessungen, wat fir déi meescht QPM Techniken net erreechbar ass, och mat Interferometrie. Wéi d'Zuel vun de Wueren an др. 53, различение экспоненциального an (bи) линейного роста требует точности в 6% vun достижимо для большинства методов QPM, даже с использованием интерферометрии. Wéi erkläert vun Zur et al.53, z'ënnerscheeden tëscht exponentiell an (bi)linear Wuesstem verlaangt <6% Genauegkeet an Biomass Miessunge, déi fir déi meescht QPM Methoden onerreechbar ass, och mat Interferometry.Wéi erkläert vun Zur et al. 53, z'ënnerscheeden tëscht exponentiellen an (bi)lineare Wuesstum erfuerdert manner wéi 6% Genauegkeet bei Biomassemiessungen, wat fir déi meescht QPM Methoden net erreechbar ass, och wann d'Interferometrie benotzt gëtt. CGM erreecht dës Genauegkeet mat Ënner-pg Genauegkeet a Biomassemiessungen36,48.
en Time-lapse besteet aus 6 OT Biller (Uelegimmersioun, 60x, NA Objektiv 1.25) an (b) Mikro-CFU Biomass Evolutioun gemooss mat CGM. Gesinn Film M7 fir méi Informatiounen.
De perfekt linear Wuesstum vu S. shibatae war onerwaart an ass nach net gemellt ginn. Wéi och ëmmer, exponentiell Wuesstum gëtt erwaart, op d'mannst well mat der Zäit multiple Divisiounen vun 2, 4, 8, 16 ... Zellen musse geschéien. Mir hunn hypothetiséiert datt linear Wuesstum wéinst Zellhemmung wéinst dichter Zellverpackung kéint sinn, sou wéi d'Zellwachstum verlangsamt gëtt a schlussendlech en dormante Staat erreecht wann d'Zelldicht ze héich ass.
Mir schlussendlech vun diskutéieren déi folgend fënnef Punkten vun Interessi am Tour: Reduktioun vun Heizung Volumen, Reduktioun vun thermesch Inertia, Interessi vun Gold Nanopartikelen, Interessi vun quantitative Phase Mikroskopie, an engem méiglech Temperatur Beräich an deem LA-HTM benotzt ka ginn.
Am Verglach mat resistive Heizung, Laserheizung, déi fir HTM Entwécklung benotzt gëtt, bitt verschidde Virdeeler, déi mir an dëser Etude illustréieren. Besonnesch a flëssege Medien am Siichtfeld vum Mikroskop gëtt den Heizvolumen bannent e puer (10 μm) 3 Bänn gehal. Op dës Manéier sinn nëmmen déi observéiert Mikroben aktiv, während aner Bakterien dormant sinn a kënne benotzt ginn fir d'Probe weider ze studéieren - et ass net néideg d'Probe ze änneren all Kéier wann eng nei Temperatur kontrolléiert muss ginn. Zousätzlech, microscale Heizung erlaabt direkt Ënnersichung vun enger grousser Palette vun Temperaturen: Figur 4c war aus engem 3-Stonn Film kritt (Movie M3), déi normalerweis d'Virbereedung an Ënnersichung vun e puer Echantillon verlaangt - eng fir all vun de Echantillon ënner Studie. y ass d'Temperatur déi d'Zuel vun den Deeg am Experiment representéiert. D'Reduktioun vum erhëtzte Volumen hält och all déi ronderëm optesch Komponenten vum Mikroskop, besonnesch d'Objektivlens, bei Raumtemperatur, wat e grousse Problem vun der Gemeinschaft war bis elo. LA-HTM ka mat all Objektiv benotzt ginn, och Ueleg-Immersiounslënsen, a bleift bei Raumtemperatur och mat extremen Temperaturen am Gesiichtsfeld. D'Haaptbegrenzung vun der Laserheizungsmethod, déi mir an dëser Etude berichten, ass datt Zellen, déi net festhalen oder schwiewen, wäit vum Siichtfeld kënne sinn a schwéier ze studéieren. Eng Ëmgéigend kéint sinn d'Lënsen mat niddereger Vergréisserung ze benotzen fir eng méi grouss Temperaturerhéijung iwwer e puer honnert Mikron z'erreechen. Dës Vorsicht ass begleet vun enger Ofsenkung vun der raimlecher Opléisung, awer wann d'Zil ass d'Bewegung vu Mikroorganismen ze studéieren, ass eng héich raimlech Opléisung net erfuerderlech.
D'Zäitskala fir d'Heizung (an d'Ofkillung) vum System \({{{{\rm{\tau }}}}}}}}}_{{{\mbox{D}}}}\) hänkt vu senger Gréisst of, nach dem Gesetz \({{{({\rm{\tau }}}}}}}_{{{\mbox{D}}}}}={L}^{2}/D\), wou \ (L\) ass d'charakteristesch Gréisst vun der Hëtztquell (den Duerchmiesser vum Laserstrahl an eiser Etude ass \(L\ ongeféier 100\) μm), \(D\) ass d'thermesch Diffusioun vun der Ëmwelt (Duerchschnëtt an eisem Fall, Glas a Waasser Diffusioun Taux \ (D \ ongeféier 2 \ fold {10} ^ {-7} \) m2 / s Dofir, an dëser Etude, Zäit Äntwerte vun der Uerdnung vun 50 ms, dh quasi-instantaneous). Temperatur Ännerungen, kann erwaart ginn Dës momentan Etablissement vun Temperatur Erhéijung net nëmmen d'Dauer vum Experiment verkierzt, mee erlaabt och präzis timing \(t=0\) fir all dynamesch Etude vun Temperatur Effekter.
Eis proposéiert Method ass applicabel fir all Liicht-absorbéierend Substrat (zum Beispill kommerziell Echantillon mat ITO Beschichtung). Wéi och ëmmer, Gold Nanopartikele kënnen eng héich Absorptioun am Infrarout a gerénger Absorptioun am sichtbare Beräich bidden, déi lescht Charakteristike vun deenen interessant sinn fir effektiv optesch Observatioun am sichtbare Beräich, besonnesch wann Dir Fluoreszenz benotzt. Zousätzlech ass Gold biokompatibel, chemesch inert, optesch Dicht ka vu 530 nm bis no Infrarout ugepasst ginn, an d'Probepräparatioun ass einfach a wiertschaftlech29.
Transversal Gitter Wavefront Mikroskopie (CGM) erlaabt net nëmmen Temperaturkartéierung op der Mikroskala, awer och Biomass Iwwerwaachung, wat et besonnesch nëtzlech mécht (wann net néideg) a Kombinatioun mat LA-HTM. An de leschte Jorzéngt sinn aner Temperaturmikroskopietechniken entwéckelt ginn, besonnesch am Beräich vun der Bioimaging, an déi meescht vun hinnen erfuerderen d'Benotzung vun Temperaturempfindleche Leuchtstoffsonden54,55. Wéi och ëmmer, dës Methode goufen kritiséiert an e puer Berichter hunn onrealistesch Temperaturännerungen bannent Zellen gemooss, méiglecherweis wéinst der Tatsaach datt d'Fluoreszenz vu ville Faktoren ausser Temperatur hänkt. Ausserdeem sinn déi meescht Leuchtstoffsonden onbestänneg bei héijen Temperaturen. Dofir representéieren QPM a besonnesch CGM eng ideal Temperaturmikroskopietechnik fir d'Liewen bei héijen Temperaturen mat opteschen Mikroskopie ze studéieren.
Studien vu S. shibatae, déi optimal bei 80 ° C liewen, weisen datt LA-HTM ka benotzt ginn fir Hyperthermophilen ze studéieren, net nëmmen einfach Thermophilen. Prinzipiell gëtt et keng Limite fir d'Temperaturbereich, déi mat LA-HTM erreecht kënne ginn, a souguer Temperaturen iwwer 100°C kënnen um atmosphäreschen Drock ouni Kachen erreecht ginn, wéi bewisen vun eisem Grupp vun 38 an der hydrothermescher Chemie Uwendungen bei Atmosphär. Drock A. A Laser benotzt fir Heizung Gold Nanopartikel 40 an déi selwecht Manéier. Also huet LA-HTM d'Potenzial fir benotzt ze ginn fir onendlech Hyperthermophilen mat Standard High-Resolutioun optesch Mikroskopie ënner Standardbedéngungen (dh ënner Ëmweltstress) ze observéieren.
All Experimenter goufen mat engem hausgemaachte Mikroskop gemaach, dorënner Köhler Beliichtung (mat LED, M625L3, Thorlabs, 700 mW), Probehalter mat manueller xy Bewegung, Objektiver (Olympus, 60x, 0,7 NA, Loft, LUCPlanFLN60X oder 60x, OIL, 1,25 NA , UPLFLN60XOI), CGM Kamera (QLSI Kräizgitter, 39 µm Pitch, 0,87 mm vum Andor Zyla Kamera Sensor) fir Intensitéit a Wavefront Imaging ze bidden, an sCMOS Kamera (ORCA Flash 4.0 V3, 16-Bit Modus, vun Hamamatsu) fir opzehuelen daten an der Figur 5 gewisen (bakteriell Schwammen). Den dichroesche Strahlsplitter ass e 749 nm BrightLine Rand (Semrock, FF749-SDi01). De Filter op der viischter Säit vun der Kamera ass e 694 Kuerzpassfilter (FF02-694 / SP-25, Semrock). Titan Saphir Laser (Laser Verdi G10, 532 nm, 10 W, pompelen Tsunami Laser Kavitéit, Spektra-Physik an der Fig. -5). 6 a 7) sinn op d'Wellelängt \({{{({\rm{\lambda }}}}}}=800\) nm gesat, wat dem Plasmonresonanzspektrum vu Gold Nanopartikel entsprécht. Raumlichtmodulatoren (1920 × 1152 Pixel) goufen vun Meadowlark Optics kaaft.
Cross grating wavefront microscopy (CGM) ass eng optesch Mikroskopietechnik baséiert op der Kombinatioun vun engem zweedimensionalen Diffraktiounsgitter (och bekannt als Kräizgitter) op enger Distanz vun engem Millimeter vum konventionelle Kamerasensor. De stäerkste gemeinsam Beispill vun engem CGM datt mir an dëser Etude benotzt hunn ass e Véier-Wellenlängt transversal Verréckelung Interferometer genannt (QLSI), wou de Kräiz-grating besteet aus engem Intensitéit / Phase checkerboard Muster agefouert a patentéiere vun Primot et al. am Joer 200034. Déi vertikal an horizontal Gitterlinne kreéieren Gitterähnlech Schatten um Sensor, d'Verzerrung vun deenen an Echtzäit numeresch veraarbecht ka ginn fir d'optesch Wellefrontverzerrung (oder gläichwäerteg Phaseprofil) vum Incident Liicht ze kréien. Wann se op engem Mikroskop benotzt gëtt, kann eng CGM Kamera den opteschen Weedifferenz vun engem gebildten Objet weisen, och bekannt als optesch Déift (OT), mat enger Empfindlechkeet op der Uerdnung vun Nanometer36. An all CGM Miessung, fir all Mängel an den opteschen Komponenten oder Trägere ze eliminéieren, muss e primäre Referenz OT Bild geholl ginn a vun all spéider Biller subtrahéiert ginn.
Temperaturmikroskopie gouf mat enger CGM Kamera gesuergt wéi an der Referenz beschriwwen. 32. Kuerz gesot, d'Heizung vun enger Flëssegkeet ännert säin Brechungsindex, a schafft en thermesche Lenseffekt, deen den Incidentstrahl verzerrt. Dës Wellefront Verzerrung gëtt vum CGM gemooss a veraarbecht mat engem Deconvolution Algorithmus fir eng dreidimensional Temperaturverdeelung am flëssege Medium ze kréien. Wann d'Gold Nanopartikel gläichméisseg duerch d'Probe verdeelt sinn, kann d'Temperaturkartéierung a bakteriefreie Gebidder gemaach ginn fir besser Biller ze produzéieren, wat mir heiansdo maachen. D'Referenz CGM Bild gouf ouni Heizung opgeholl (mam Laser aus) an duerno op der selwechter Plaz am Bild mam Laser opgeholl.
Dréchen Mass Miessung gëtt mat der selwechter CGM Kamera erreecht fir Temperatur Imaging benotzt. CGM Referenzbilder goufen kritt andeems d'Probe séier an x an y wärend der Belaaschtung bewegt gouf als Mëttel fir all Inhomogenitéit am OT duerch d'Präsenz vu Bakterien duerchschnëttlech ze maachen. Vun OT Biller vu Bakterien, gouf hir Biomass kritt mat engem Ensembel vu Biller iwwer Beräicher ausgewielt mat Matlab d'hausgemaachte Segmentatioun Algorithmus (kuckt Ënnersektioun "Numeresch Code") no der Prozedur am Ref. 48. Kuerz gesot, mir benotzen d'Relatioun \(m={\alpha}^{-1}\iint {{\mbox{OT}}}\left(x,y\right){{\mbox{d}} } x{{\mbox{d}}}y\), wou \({{\mbox{OT}}}\lénks(x,y\right)\) d'optesch Déiftbild ass, \(m\) ass d'Trockengewiicht an \({{{{{\rm{\alpha }}}}}}\) ass eng Konstant. Mir hu gewielt \({{{\rm{\alpha))))))=0.18\) µm3/pg, wat eng typesch Konstante fir lieweg Zellen ass.
En Deckelschluss 25 mm Duerchmiesser an 150 µm décke Beschichtete mat Gold Nanopartikele gouf an eng AttofluorTM Chamber (Thermofisher) gesat mat de Gold Nanopartikelen no uewen. Geobacillus stearothermophilus war iwwer Nuecht am LB mëttelfristeg precultured (200 rpm, 60 ° C) virun all Dag vun Experimenter. E Tropfen vu 5 μl vun enger Suspension vu G. stearothermophilus mat enger optescher Dicht (OD) vun 0,3 bis 0,5 gouf op engem Deckelschluss mat Gold Nanopartikel gesat. Duerno gouf e ronnen Deckelschluss 18 mm Duerchmiesser mat engem Lach 5 mm Duerchmiesser am Zentrum op d'Tropf gefall, a 5 μl bakteriell Suspension mat der selwechter optescher Dicht gouf ëmmer erëm an d'Mëtt vum Lach applizéiert. D'Wells op Coverslips goufen am Aklang mat der Prozedur am Ref beschriwwen virbereet. 45 (kuckt Zousätzlech Informatioun fir méi Informatioun). Dann fügen Se 1 ml LB Medium op de Coverslip fir ze verhënneren datt d'Flëssegschicht dréchent. Dee leschte Coverslip gëtt iwwer den zouenen Deckel vun der Attofluor ™ Chamber plazéiert fir d'Verdampfung vum Medium während der Inkubatioun ze vermeiden. Fir Keimungsexperimenter hu mir Spore benotzt, déi, no konventionellen Experimenter, heiansdo den Top Coverslip ofgedeckt hunn. Eng ähnlech Method gouf benotzt fir Sulfolobus shibatae ze kréien. Dräi Deeg (200 rpm, 75 ° C) vun der virleefeg Kultivatioun vun Thiobacillus serrata goufen am mëttel 182 (DSMZ) duerchgefouert.
Echantillon vu Gold Nanopartikele goufen duerch micellar Blockcopolymer Lithographie virbereet. Dëse Prozess gëtt am Detail am Kap. 60. Kuerz, Mizellen, déi Goldionen kapsuléieren, goufen synthetiséiert andeems de Copolymer mat HAuCl4 am Toluen vermëschen. Déi gereinegt Coverslips goufen duerno an d'Léisung ënnerdaucht a mat UV-Bestrahlung an der Präsenz vun engem Reduktiounsmëttel behandelt fir Gold Somen ze kréien. Schlussendlech goufen d'Gold Somen ugebaut andeems se e Coverslip mat enger wässerlecher Léisung vu KAuCl4 an Ethanolamin fir 16 Minuten kontaktéiert hunn, wat zu enger quasi-periodescher a ganz eenheetlecher Arrangement vun net-kugelfërmeg Gold Nanopartikel am noer Infrarout gefouert huet.
Fir d'Interferogrammen op OT Biller ze konvertéieren, hu mir en hausgemaachte Algorithmus benotzt, wéi am Link detailléiert. 33 an ass verfügbar als Matlab Package am folgenden ëffentleche Repository: https://github.com/baffou/CGMprocess. De Package kann Intensitéit an OT Biller berechnen baséiert op opgeholl Interferogramme (inklusiv Referenzbilder) a Kameraarray Distanzen.
Fir d'Phasemuster ze berechnen, déi op SLM applizéiert gëtt fir e bestëmmten Temperaturprofil ze kréien, hu mir e virdru entwéckelt hausgemaachte Algorithmus39,42 benotzt deen am folgenden ëffentleche Repository verfügbar ass: https://github.com/baffou/SLM_temperatureShaping. Den Input ass dat gewënschte Temperaturfeld, dat digital oder iwwer e Monochrom Bmp Bild gesat ka ginn.
Fir d'Zellen ze segmentéieren an hir dréchent Gewiicht ze moossen, hu mir eise Matlab Algorithmus benotzt, deen am folgenden ëffentleche Repository publizéiert gouf: https://github.com/baffou/CGM_magicWandSegmentation. Op all Bild muss de Benotzer op d'Bakterien oder mCFU vun Interesse klicken, d'Wandempfindlechkeet upassen an d'Auswiel bestätegen.
Fir méi Informatioun iwwer Studiedesign, kuckt den Nature Research Report Abstrakt verbonne mat dësem Artikel.
Donnéeën, déi d'Resultater vun dëser Etude ënnerstëtzen, si vun den jeweilegen Autoren op raisonnabel Ufro verfügbar.
De Quellcode, deen an dëser Etude benotzt gëtt, ass an der Methode Sektioun detailléiert, an Debug Versioune kënnen erofgeluede ginn https://github.com/baffou/ an de folgende Repositories: SLM_temperatureShaping, CGMprocess, an CGM_magicWandSegmentation.
Mehta, R., Singhal, P., Singh, H., Damle, D. & Sharma, AK. Mehta, R., Singhal, P., Singh, H., Damle, D. & Sharma, AK.Mehta, R., Singhal, P., Singh, H., Damle, D., Sharma, AK. Iwwerbléck iwwer Thermophilen an hir breet Uwendung. Mehta R, Singhal P, Singh H, Damle D, Sharma AK 深入了解嗜热菌及其广谱应用。 Mehta, R., Singhal, P., Singh, H., Damle, D., & Sharma, AK.Mehta R., Singhal P., Singh H., Damle D. an Sharma AK Eng déif Verständnis vun thermophiles an eng breet Palette vun Uwendungen.3 Biotechnologie 6, 81 (2016).
Post Zäit: Sep-26-2022